微生物檢驗中培養基制備的注意事項

更新時間：2024-03-26

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培養基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養物質和環境條件。培養基的質量直接關系到檢驗結果的準確性和可靠性，因此對于微生物檢驗而言，培養基的質量控制尤為重要。培養基的主要作用有兩方面：①提供微生物生長所需的營養物質；②培養基具有選擇性和差異性，可以選擇特定類型的細菌或真菌進行培養，并區分不同種類的微生物。因此，在微生物檢驗中，必須對培養基進行嚴格的質量控制，只有優質的培養基才能為微生物檢驗提供精準、可靠的檢測結果。
培養基的概述
培養基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質，按照物理性質可以分成液體培養基、固體培養基、半固體培養基和脫水培養基，按照化學性質可以分成天然培養基、組合培養基和半組合培養基，按照功能可以分成選擇性培養基、鑒別培養基。不同培養基要求不同，保存方式也不同。在受熱、吸潮后，培養基極易被微生物污染或分解變質，需在避光、防潮、陰涼處儲存。
培養基的采購驗收
微生物檢驗需使用大量培養基。為提高檢驗效率，實驗室多使用商品化即用型培養基、商品化脫水合成培養基。在培養基的采購中，應選擇國內、外商家的產品，并向生產企業索要培養基成分名稱、產品編號、批號、最終 pH值、儲存條件、生產日期、有效期、質控報告和必要的相關信息，以保證培養基的質量。在產品交貨驗收時，購買者需對產品包裝的完整性、生產日期、有效期和產品合格證明等進行核驗，檢查培養基的顏色、性質等是否符合實驗室相關標準，培養基檢驗合格后進行入庫登記。
培養基的制備
配制要求：正確按要求制備培養基是做好微生物檢驗的基礎。實驗人員使用商品化脫水合成培養基配制培養基時，要嚴格按照產品說明進行配制，并做好配制記錄。在配制過程中，實驗人員需要嚴格遵守相關操作標準，佩戴口罩進行操作，避免吸入含有有毒物質的培養基粉末，稱量、溶解應使用專門的角匙，不使用金屬制品，避免金屬離子混入培養基，影響微生物生長；準確稱量后，應先加入適量的水充分溶解，再加水至所需量進行加熱，加熱中應不斷攪拌，防止培養基在容器底部積聚；調節pH值，分裝到比培養基體積最少大 20%的容器中，按說明要求進行滅菌。粉末狀態的培養基開封后應存放在陰涼干燥處，及時使用，環境濕度過大會使培養基出現受潮、結塊、污染等情況。對于瓊脂類培養基，可采用沸水浴或流動蒸汽的加熱方式進行融化，但反復凍融只允許進行1次。
配制用水：水是配制培養基的一部分，一般使用純化水。還應定期檢查培養基配制用水的微生物污染情況，應符合純化水要求。
滅菌：滅菌能確保培養基質量達標，實驗室常采用濕熱滅菌法，培養基應按照產品使用說明要求進行滅菌，每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學指示卡，驗證滅菌效果。一些培養基可以通過煮沸的方式進行滅菌，如結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養基、亞硫酸鉍瓊脂培養基。實驗人員應及時將培養基從滅菌鍋中取出，盡快冷卻至所需溫度，防止加熱過度，對實驗數據造成影響；要檢查培養基的pH值、色澤、均勻度等指標，確保符合要求后貼上標簽，標明名稱、日期、效期等基本信息。
制備：制備平板時，將滅菌后的培養基傾注于滅菌過的干燥平皿中，在平皿中形成至少3mm的厚度，直徑90mm的平皿通常需要加入18～20mL 的瓊脂培養基，需要保存或培養超過48h的培養基應傾注更多培養基。培養基冷卻凝固后應立即使用或儲存，儲存時應標記好培養基名稱及制備日期，密封后放置在2～8℃冰箱中。制備斜面培養基時，應先將培養基分裝到試管中，通常每管加入10mL培養基，高壓滅菌，在培養基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置，待冷卻凝固后方能使用和保存。對于液體培養基，根據使用要求直接分裝至三角瓶或試管中，滅菌，冷卻至室溫直接使用或保存。
培養基的儲存
驗收入庫的培養基應嚴格按照生產廠家標明的儲存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封后的商品化脫水合成培養基要放置在密閉容器中保存，在瓶身注明第一次開封日期。實驗室自制培養基應避光、干燥保存，需冷藏的培養基可放置在2～8℃冰箱中保存，平板保存時間通常為2～4 周，瓶裝及試管裝培養基保存時間一般為3～6個月，具體效期應進行驗證。每次使用培養基前，要觀察顏色變化、流動性、均勻性、是否結塊和是否污染等情況。如果發現培養基出現受潮、結塊、其他性狀明顯改變的情況，應停止使用。

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