細胞傳代培養實驗

更新時間：2021-05-21

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體外培養的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續。二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境，培養箱要求穩定的溫度（37°C）、穩定的CO2水平（5%）、恒定的酸堿度（pH值：7.2-7.4）、較高的相對飽和濕度（95%），來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置，是細胞、組織、細菌培養的一種先進儀器，是開展免疫學、腫瘤學、遺傳學及生物工程所必須的關鍵設備。

培養的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭，將培養的細胞分散，從容器中取出，以１:２或１:３以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養；細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。

在一代中，細胞培增３～６次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數/１００個細胞。一般細胞分裂指數介于０.２％～０.５％，腫瘤細胞可達３～５％；細胞接種２～３天分裂增殖旺盛，是活力Zui好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

實驗步驟：

１.將長成的培養細胞從二氧化碳培養箱中取出，在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養液，加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜)，靜置５～１０分鐘。

２.在倒置鏡下觀察被消化的細胞，如果細胞變圓，相互之間不再連接成片，這時應立即在超凈臺中將消化液倒掉，加入３～５ml新鮮培養液，吹打，制成細胞懸液。

３.將細胞懸液吸出２ml左右，加到另一個培養瓶中并向每個瓶中分別加３ml左右培養液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養箱中，繼續進行培養。一般情況，傳代后的細胞在２小時左右就能附著在培養瓶壁上，２～４天就可在瓶內形成單層，需要再次進行傳代。

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