植物的組織培養(yǎng)

更新時間：2019-11-28

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根據(jù)所配培養(yǎng)基的要求，從各母液只能感取出大量元素、微量元素、鐵液、維生素、激素、蔗糖等，置于容量瓶中定容至100ml，稱取瓊脂加入400ml置于大燒杯中加熱時不斷攪拌，十分鐘后瓊脂溶解，呈透明狀即可，放置稍涼。
溶解好的瓊脂溶液中加入第1項中所取出的各物質(zhì)及糧溶液100ml，不斷攪拌使培養(yǎng)基混合均勻。
用PH計或試紙測PH值，用INNaOH或INNCL調(diào)至5.8。

將配制好的培養(yǎng)基分裝于清洗干凈，烘干后的三角瓶中，培養(yǎng)基高度約1cm左右，瓊脂約在40度時才凝固，所以有充足的時間業(yè)分裝。

將分裝好的培養(yǎng)基的三角瓶中塞上棉塞，大小要合適，然后包上牛皮紙，用橡皮盤扎緊。牛皮紙上標以記號準備滅菌。
培養(yǎng)基的滅菌與保存。
培養(yǎng)基內(nèi)含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，有利于細菌和真菌繁殖，所以培養(yǎng)基配好后要及時滅菌，用高壓鍋滅菌注意以下幾點：
（1）檢查鍋內(nèi)的水量，一般高度到支持鍋座水平即可。
（2）蓋好鍋蓋，擰緊螺旋，然后檢查排氣閥是事通暢。
（3）用煤氣灶或電爐加熱，當氣壓指針上升至6時，放一次氣或打開放氣閥，加熱至鍋內(nèi)冒出大量熱氣，以排盡鍋內(nèi)空氣。
（4）高壓鍋內(nèi)溫度達1200C，0，1Mpa壓力時，這時保持高壓來菌20分鐘，以后切斷電源，是鍋內(nèi)壓力自然慢慢下降，也可緩緩打開放氣閥放氣，使鍋內(nèi)壓力接近于0（氣壓表指針下降至0），這時*打開放氣閥。
（5）打開鍋蓋，取出培養(yǎng)基、滅菌水、培養(yǎng)皿、濾紙等。滅過菌的培養(yǎng)基通常置于100C下保存，待培養(yǎng)基放置2—3天后，瓶內(nèi)水吸收干后即可使用。培養(yǎng)基滅菌后不宜久放，一般不超過一個月，多數(shù)情況滅菌后兩周內(nèi)使用完。
接種——胡蘿卜愈傷組織的培養(yǎng)。
接種，是指經(jīng)過消素好的材料在無菌的情況下切成小塊（外植體）并放入培養(yǎng)基的過程，要在無菌的環(huán)境中進行。接種進要求無菌操作，所有接種材料要預選消毒。
提前15分鐘將超凈工作臺打開過濾空氣。
雙手用肥皂洗凈，以70%乙醇棉擦試一遍。
取已洗凈的胡蘿卜5cm切段，用70%億醇浸炮30秒。然后無菌水沖凈，再2%安替福氏浸炮15秒，無菌水沖洗3——4遍置培養(yǎng)皿中。
在培養(yǎng)皿中用打孔器取下胡蘿卜的韌皮部切段，切去兩端，將材料切成厚3mm的薄片。
接種，用鑷子將材料薄片迅速接入培養(yǎng)基中，在酒精燈上移動著燒一下瓶口，塞上棉花塞。

培養(yǎng)，接好種的培養(yǎng)基，放置溫度23——28℃光照1000——5000ＬuX，光照時間每天約16——18小時的人工氣候箱中進行培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)組織的不斷生長和細胞分裂，不久即形成愈傷組織并開始
植株誘導和轉(zhuǎn)載
除一些基尖，側(cè)牙球莖之類的材料能直接培養(yǎng)長大志植物外，葉，莖段，花瓣等要經(jīng)過一個脫分化和再分化的過程，才能長成植株。
由于加入培養(yǎng)基中各種激素的比例不同，外植本可以沿著不同方向分化；一種是先由外植本產(chǎn)生愈傷組織，有愈傷組織再分化出不字根或不定芽，也可以由愈傷組織產(chǎn)生胚狀體，再發(fā)育成小植株：另一種是不經(jīng)愈傷組織，可直接誘導出胚狀全而發(fā)育成植物。
不同來源的外植體再生植株的途徑
胡蘿卜肉質(zhì)根誘導產(chǎn)生了愈傷組織之后，需進一步轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基誘導產(chǎn)生根和芽，以獲得再生植株。
生長點、側(cè)芽、原球莖、胚狀體根、莖段、葉、花芽、花瓣、胚狀體愈傷組織；再分化的芽和根；試管苗。

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